中科院团队研发超分辨率技术提高成像效率

　　中国科学院发布消息，中国研究团队开发了一种先进的成像技术，以前所未有的速度实现了超分辨率显微镜，并且图像数量更少。新方法应该可以捕获活细胞中以前无法达到的速度。

　　超分辨率技术（通常称为纳米技术）通过克服光的衍射极限来实现纳米级分辨率。尽管纳米显微镜可以捕获细胞内单个分子的图像，但很难与活细胞一起使用，因为重建图像需要成百上千的图像-这个过程太慢，无法捕获快速变化的动力学。

　　在由光学学会（OSA）出版的《高影响力研究》杂志Optica页中，中科院上海光学精密机械研究所（SIOM）的研究人员描述了他们如何使用称为“鬼影”的非常规成像方法提高纳米显微镜的成像速度。他们的新技术使用比传统纳米技术少几个数量级的图像来产生纳米分辨率。

　　研究小组共同负责人王忠阳说：“我们的成像方法可以潜在地探测亚细胞结构中毫秒级尺度上发生的动力学，其空间分辨率为数十纳米-发生生物过程的时空分辨率。”

　　结合技术以实现更快的成像

　　新方法基于随机光学重建显微镜（STORM），这是2014年获得诺贝尔化学奖的三位研究人员之一。STORM，有时也称为光激活定位显微镜（PALM），是一种使用荧光的广域技术在发光状态（亮）和暗状态（灭）之间切换的标签。

　　采集成百上千个图像，每个图像捕获在给定时间开启的荧光标记的子集，可以确定每个分子的位置并用于重建荧光图像。

　　研究人员转向重影成像，以加快STORM成像过程。鬼影成像通过将与对象交互的光图样与不与之交互的参考图样相关联来形成图片。

　　单独地，灯光图案不会携带有关物体的任何有意义的信息。研究人员还使用了压缩成像技术，这是一种计算方法，可以使用更少的曝光量重建图像，因为它使用一种算法来填充丢失的信息。

　　“尽管STORM需要低密度的荧光标记和许多图像帧，但是我们的方法可以使用很少的帧和高密度的荧光团来创建高分辨率图像，”研究团队的其他共同负责人之一韩申生说。“它也不需要任何复杂的照明，这有助于减少可能损害动态生物过程和活细胞的光致漂白和光毒性。”

　　提高成像效率

　　为了实施这项新技术，研究人员使用了一种称为随机相位调制器的光学组件，将样品中的荧光转变为随机的斑点图案。通过这种方式对荧光进行编码，可以使非常快的CMOS相机的每个像素在单个帧中收集来自整个对象的光强度。

　　为了通过重影成像和压缩成像形成图像，将光强度与参考光图案关联起来只需一步即可。结果是更有效的图像获取，站长资源平台并减少了形成高分辨率图像所需的帧数。

　　研究人员通过使用该技术对60纳米环成像来测试了该技术。新的纳米显微镜方法仅使用10张图像即可解决环问题，而传统的STORM方法可能需要多达4000帧才能达到相同的结果。新方法还解决了带有100幅图像的40纳米标尺。

　　“我们希望这种方法可以用于各种荧光样品，包括那些荧光强度比本研究中所用荧光弱的样品。” Wang说。

　　研究人员还希望使该技术更快，以实现具有大视野的视频速率成像，从而获取3D和彩色图像。